Por el momento me encuentro recuperándome de una operación de la rodilla (reconstrucción del ligamento anterior cruzado) y no he podido asistir al laboratorio. Espero poder comenzar a asistir en dos semanas. En las próximas semanas me reuniré con mi mentora para establecer cuales serán los objetivos para este nuevo semestre. A mi entender continuaremos tratando de clonar los fragmentos del promotor de CHDL-1 en el vector pGL4 para luego proceder a transfretar las células Hela con los plasmidios extraídos y finalmente llevar a cabo los ensayos de luciferasa.
El trabajo de este semestre es continuación del trabajo hecho el semestre anterior. Al finalizar el semestre pasado estábamos teniendo problemas clonando los fragmentos del promotor en el vector pGL-4. Este semestre trataremos de optimizar las condiciones de esta clonación para poder seguir adelante con la investigación.
La técnica mas importante que estaré llevando a cabo es el ensayo del gen reportero específicamente el de luciferasa. Estos genes se pueden usar para ver la actividad de un promotor particular en un organismo. El gen reportero se encuentra bajo el control del promotor y la actividad del producto del gen reportero es medida cuantitativamente. El producto del gen reportero de luciferasa es la expresión de una fluorescencia por la catalización de una reacción de enzima luciferasa con luciferin. Adjunto un esquema del proceso. 